酵母文库筛选技术服务

酵母文库筛选技术服务

目前,在国内外一流实验室中,酵母双杂交及其衍生技术已成为研究蛋白互作的首选方法,科研工作者利用它揭示了大量未知蛋白质的相互作用。据统计,目前超过一半的蛋白相互作用是通过酵母双杂交实验发现的。
正和生物拥有目前市面上相对全面的筛库体系,可以提供酵母单杂交、酵母双杂交、酵母三杂交筛库技术服务。我们拥有优秀的科研团队,丰富的筛库经验,交付周期快,相对与同行缩短30%,欢迎前来咨询。
一、我们可以提供的服务
二、实验原理
酵母双杂交原理
    酵母双杂交系统是基于对真核细胞调控转录起始过程的认识的基础上而建立的。基因的表达由转录激活因子来激活,转录激活因子必须依靠DNA结合区(BD) 和激活区(AD)这两个结构域来发挥作用。BD或AD单独作用不能激活转录反应,但当两者在上游较为接近时则呈现完整的转录因子活性,启动下游基因的表达。因此,将DNA- BD序列与已知的蛋白质X (诱饵蛋白)融合,构建BD-X融合表达载 体,将AD与拟研究的蛋白Y (Prey) 或基因片段、cDNA文库融合,构建AD-Y融合表达载体,然后把这两个融合表达载体同时导人酵母细胞中,如果X蛋白和Y蛋白可相互作用,则可使BD和AD在空间上相互接近形成-一个有效的转录激活因子,从而激活UAS ( upstream activating sequence)下 游启动子,启动下游报告基因的表达,反之,BD与AD就不能结合,报告基因也不能被启动表达。
三、技术应用
酵母双杂交应用



四、文章案例

案例文章1:

标题为“GmNAC8 acts as a positive regulator in soybean drought stress” 通过酵母文库、蛋白互作及转基因功能验证揭示了GmNAC8在大豆干旱胁迫中起正向调控作用。

研究背景:

NAC蛋白是参与调控植物发育和非生物胁迫的最大转录因子家族之一。大豆NAC转录因子GmNAC8可能参与大豆对干旱胁迫的耐受性。

研究问题:

大豆GmNAC8基因在大豆抗旱性调控中的具体作用。

研究结果:

1、GmNAC8蛋白定位于细胞核,GmNAC8基因在干旱、脱落酸(ABA)、乙烯(ETH)和水杨酸(SA)处理下显著诱导表达。

案例图
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2、大豆GmNAC8基因正调控大豆对干旱的耐受性。

案例图
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3、通过筛选大豆干旱酵母文库发现GmNAC8蛋白与干旱诱导的GmDi19-3蛋白在细胞核中存在物理相互作用。

案例图

4、GmNAC8的互作蛋白GmDi19-3也可以被干旱、脱落酸(ABA)、乙烯(ETH)和水杨酸(SA)诱导表达,并正调控大豆对干旱的耐受性。

案例图



案例文章2:

标题为“Screening and identification of host proteins interacting with Iris. lactea var. chinensis metallothionein IlMT2a by yeast two-hybrid assay”通过酵母双杂交揭示:金属硫蛋白基因IlMT2a在镉胁迫耐受性中的作用。

研究背景:

马蔺是一种具有耐镉性的植物,其金属硫蛋白基因IlMT2a被认为可以用做提高植物耐镉性的重要基因。

研究问题:

对镉处理后的马蔺cDNA构建酵母文库,使用IlMT2a作为诱饵基因进行酵母双杂交筛选与耐镉性相关的互作的蛋白,解析IlMT2a基因在镉胁迫中的作用机制。

研究结果:

1、对互作蛋白基因序列进行分析,鉴定了几种与光合作用、金属诱导的活性氧和运输系统相关的宿主蛋白

案例图
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2、IlMT2a的相互作用蛋白中发现一个尚未被鉴定的IlMT3基因,其可能与IlMT2a互作发挥功能。

案例图
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3、IlMT3作为IlMT2a的相互作用蛋白正调控拟南芥转化对镉胁迫的耐受性。

案例图

这些结果为进一步解析了IlMT2a在镉胁迫耐受性中的作用,为研究植物对镉胁迫耐受性的机制奠定基础。